[1]熊丹,周霆,田方艳,等.甘蓝型油菜脂肪酸脱氢酶2兔源多克隆抗体的制备与应用[J].江苏农业学报,2020,(04):851-857.[doi:doi:10.3969/j.issn.1000-4440.2020.04.007]
　XIONG Dan,ZHOU Ting,TIAN Fang-yan,et al.Preparation and application of rabbit-derived polyclonal antibody against fatty acid desaturase 2 in Brassica napus[J].,2020,(04):851-857.[doi:doi:10.3969/j.issn.1000-4440.2020.04.007]
点击复制

甘蓝型油菜脂肪酸脱氢酶2兔源多克隆抗体的制备与应用()
分享到：

江苏农业学报[ISSN:1006-6977/CN:61-1281/TN]

卷:
期数:
2020年04期
页码:
851-857
栏目:
遗传育种·生理生化
出版日期:
2020-08-31

文章信息/Info

Title:
Preparation and application of rabbit-derived polyclonal antibody against fatty acid desaturase 2 in Brassica napus
作者:
熊丹1; 周霆1; 田方艳2; 饶力群1; 陈松3; 汪启明1
(1.湖南农业大学生物科学技术学院，湖南长沙410128；2.湖南远泰生物技术有限公司，湖南长沙410000；3.江苏省农业科学院经济作物研究所/农业部长江下游棉花与油菜重点实验室,江苏南京210014）
Author(s):
XIONG Dan1; ZHOU Ting1; TIAN Fang-yan2; RAO Li-qun1; CHEN Song3; WANG Qi-ming1
(1.College of Bioscience and Biotechnology, Hunan Agricultural university, Changsha 410128, China;2.Hunan Forevertech Biotechnology Co., Ltd., Changsha 410000, China;3.Institute of Industrial Crops, Jiangsu Academy of Agricultural Sciences/Key Laboratory of Cotton and Rapeseed, Ministry of Agriculture, Nanjing 210014, China)
关键词:
脂肪酸脱氢酶2; 多克隆抗体; 油酸; 甘蓝型油菜
Keywords:
fatty acid desaturase 2(FAD2); polyclonal antibody; oleic acid; Brassica napus
分类号:
Q786
DOI:
doi:10.3969/j.issn.1000-4440.2020.04.007
文献标志码:
A
摘要:
脂肪酸脱氢酶2(FAD2）是调控油菜种子油酸含量的关键酶。为建立其灵敏、便捷的免疫学检测方法，本研究合成了BnFAD2(UniProtKB:C3W518)中2个多肽片段，与KLH载体蛋白偶联，混合免疫新西兰大白兔，分离纯化得到了油菜BnFAD2兔源多克隆抗体。应用于FAD2-RNAi高油酸转基因油菜品系W-4不同世代果荚及成熟叶片总蛋白质的免疫印迹检测，结果表明，该兔源多克隆抗体，可在油菜内质网成分中识别FAD2，特征性条带大小为95 000。在果荚总蛋白质样本中，WT的FAD2含量高于转基因材料W-4，而在叶片总蛋白质样本中WT和W-4的FAD2含量相同。本研究成功制备出BnFAD2兔源多克隆抗体，并首次验证出油菜内源性FAD2以多聚体形式行使功能，为BnFAD2快速检测以及进一步研究BnFAD2对油脂稳定性影响提供研究工具。
Abstract:
Fatty acid desaturase 2 (FAD2) is the key enzyme regulating oleic acid content. The immunological methods for its rapid detection are limited by the lack of antibodies. In this study, the Brassica napus FAD2 polyclonal antibodies were successfully prepared with the rabbit immunized by two synthesized polypeptides from BnFAD2 (UniProtKB: C3W518). The pods or mature leaves extracts of different generations of W-4 which was the RNAi transgenic material were detected by western blot. The results showed that the rabbit-derived polyclonal antibody could recognize the FAD2 in the endoplasmic reticulum, and the size of characteristic band was 95 000. The content of FAD2 in WT was higher than that in transgenic material W-4 in pods extracts, but the content of FAD2 in WT was the same as that in W-4 in leaves extracts. For the first time, the endogenous BnFAD2 is verified to exercise function in the form of polymer, providing a research tool for rapid detection of BnFAD2 and further study of the effect of BnFAD2 on oil stability.

参考文献/References:

[1]李娜，杨涛. 我国油菜籽产业发展现状及趋势展望[J].农业展望，2009(2）：21-23.
[2]王永进，于潇. 天然植物功能性油脂的相关研究进展[J].现代食品，2017(4）：48-51.
[3]靳革，李娟，赵福阳，等. 油脂中脂肪酸的构成及功能研究进展[J].饲料与畜牧，2017(20）：60-61.
[4]徐建国，潘娅静，赵洁.ω-3多不饱和脂肪酸与心血管疾病[J].临床内科杂志，2008，25(12）：855-856.
[5]VERARDO V，FERIOLI F，RICIPUTI Y，et al. Evaluation of lipid oxidation in spaghetti pasta enriched with long chain n-3 polyunsaturated fatty acids under different storage conditions[J].Food Chemistry，2009，114(2）：472-477.
[6]王 洁，邹惠玲，夏攀登，等.植物油脂氧化及其氧化稳定性研究进展[J].保鲜与加工，2019，19(4）：207-210.
[7]PIRJO T， VILKKI J， VIHINEN M.Mapping and cloning of FAD2 gene to develop allele-specific PCR for oleic acid in spring turnip rape (Brassica rapa ssp. oleifera)[J]. Molecular Breeding，1998，4(6）：543-550.
[8]HOBBS D H，FLINTHAM J E，HILLS M J. Genetic control of storage oil synthesis in seeds of arabidopsis[J].Plant Physiology， 2004， 136(2）：3341-3349.
[9]SCHIERHOLT A，BECKER H C，ECKE W. Mapping a high oleic acid mutation in winter oilseed rape(Brassica napus L.)[J].Theoretical and Applied Genetics，2000，101(5/6）：897-901.
[10]HU X，SULLIVAN-GILBERT M，GUPTA M，et al. Mapping of the loci controlling oleic and linolenic acid contents and development offad2andfad3allele-specific markers in canola (Brassica napus L.)[J].Theoretical and Applied Genetics，2006，113(3）：497-507.
[11]MCCARTNEY A W，DYER J M，DHANOA P K，et al. Membrane-bound fatty acid desaturases are inserted co-translationally into the ER and contain different ER retrieval motifs at their carboxy termini[J].Plant Journal，2004，37(2）：156-173.
[12]JUNG J H，KIM H，GO Y S，et al. Identification of functionalBrFAD2-1gene encoding microsomal delta-12 fatty acid desaturase from Brassica rapa and development of Brassica napus containing high oleic acid contents[J].Plant Cell Reports，2011，30(10）：1881-1892.
[13]刘睿洋，刘芳，官春云. 甘蓝型油菜BnFAD2基因的克隆、表达及功能分析[J].作物学报，2016，42(7）：1000-1008.
[14]RADOVANOVIC N，THAMBUGALA D，DUGUID S，et al. Functional characterization of flax fatty acid desaturase FAD2 and FAD3 isoforms expressed in yeast reveals a broad diversity in activity[J].Molecular Biotechnology，2014，56(7）：609-620.
[15]杨庆勇. 油菜种子高油酸低亚麻酸的遗传控制及等位基因特异标记开发[D].武汉：华中农业大学，2012.
[16]倪雪峰. 利用DGAT1、SLC、FAD2和FAD3基因改良拟南芥和甘蓝型油菜的含油量和脂肪酸不饱和性[D].杨凌：西北农林科技大学，2014.
[17]陈松，彭琦，高建芹，等. FAD2基因下调表达的甘蓝型油菜W-4株系脂肪酸及品质分析[J].农业科学与技术(英文版），2015，16(8）：1769-1774.
[18]杨明轩，周扬，陆俊，等. 气相色谱内标法测定沙棘果肉油和种子油中的主要脂肪酸[J].湖北农业科学，2017，56(9）：1734-1738，1741.
[19]汪海滔，薄华本，陈业诚，等.GC法同时测定火麻仁油中油酸、亚油酸和α-亚麻酸的含量[J].广东化工，2016，43(7）：177-179.
[20]罗国平，梁宇柱，闫梦茹，等.HPLC法测定牡丹籽油中游离型和结合型α-亚麻酸、亚油酸及油酸的含量[J].中国油脂，2017，42(8）：140-144.
[21]宋涛，张凤枰，刘耀敏，等.透反射近红外光谱法快速测定大豆油中的脂肪酸[J].光谱学与光谱分析，2012，32(8）：2100-2104.
[22]LOU Y，SCHWENDER J，SHANKLIN J. FAD2 and FAD3 desaturases form heterodimers that facilitate metabolic channeling in Vivo[J].Journal of Biological Chemistry，2014，289(26）：17996-18007.
[23]SAHA S，RAGHAVA G P S.Prediction of continuous B-cell epitopes in an antigen using recurrent neural network[J].Proteins Structure Function and Bioinformatics， 2006，65(1）：40-48.
[24]EPRINTSEV A T，GATAULLINA M O.Isolation，purification，and properties of peroxisomal malate dehydrogenase from maize mesophyll[J]. Applied Biochemistry and Microbiology，2018，54(3）：320-323.
[25]王凤. 拟南芥内质网上的Profilin2蛋白结合蛋白的分离与纯化[D]. 北京：中国农业大学, 2005.
[26]孔君，刘箐，韩跃武，等.单克隆抗体制备技术的最新进展及应用前景[J].免疫学杂志，2011，27(2）：170-173.
[27]刘媛，刘贤进，余向阳，等. Milbemycin Oxime半抗原设计及其抗体制备[J].农药学学报，2005，7(3）：285-288.
[28]晁博， 薛飞群.小分子半抗原抗体制备技术的研究进展[J].中国兽医科学， 2006，36(9)：757-762.
[29]周晓婴，申爱娟，张洁夫，等.RNAi沉默转基因油菜fad2基因表达的种子特异性分析[J].分子植物育种，2012， 10(3）：305-310.
[30]陈松，彭 琦，周晓婴，等.转基因油菜 W-4 fad_2基因沉默的种子特异性分析(英文）[J]. 农业科学与技术，2014，15(8）：1308-1311，1316.

相似文献/References:

[1]张帅,齐颖颖,张红星,等.快速检测生鲜肉中三种食源性致病菌[J].江苏农业学报,2016,(04):939.[doi:10.3969/j.issn.100-4440.2016.04.036]
　ZHANG Shuai,QI Ying-ying,ZHANG Hong-xing,et al.Rapid detection of three foodborne pathogens in raw meat[J].,2016,(04):939.[doi:10.3969/j.issn.100-4440.2016.04.036]
[2]顾玲玲,朱善元,成大荣,等.玉型鸭甲型肝炎病毒VP1 基因的原核表达及多克隆抗体的制备[J].江苏农业学报,2017,(01):151.[doi:10.3969/j.issn.1000-4440.2017.01.024 ]
　GU Ling-ling,ZHU Shan-yuan,CHENG Da-rong,et al.Prokaryotic expression and antiserum preparation of the VP1 gene of duck hepatitis virus type I[J].,2017,(04):151.[doi:10.3969/j.issn.1000-4440.2017.01.024 ]
[3]雷明明,邵西兵,施振旦.鸽子瘦素基因成熟肽重组蛋白的表达及多克隆抗体的制备[J].江苏农业学报,2017,(01):155.[doi:10.3969/j.issn.1000-4440.2017.01.025 ]
　LEI Ming-ming,SHAO Xi-bing,SHI Zhen-dan.Cloning of pigeon leptin mature peptide cDNA sequence and preparations of the recombinant protein and polyclonal antibody[J].,2017,(04):155.[doi:10.3969/j.issn.1000-4440.2017.01.025 ]
[4]锡林高娃,薛晓阳,吴金花,等.金黄色葡萄球菌表面蛋白nEBPS抗体的制备和纯化[J].江苏农业学报,2015,(06):1430.[doi:doi:10.3969/j.issn.1000-4440.2015.06.037]
　XI LIN Gao-wa,XUE Xiao-yang,WU Jin-hua,et al.Preparation and purification of polyclonal antibody against Staphylococcus aureus surface protein nEBPS[J].,2015,(04):1430.[doi:doi:10.3969/j.issn.1000-4440.2015.06.037]
[5]杨伟群,管月清.氯霉素人工多克隆抗体的制备、纯化与特性分析[J].江苏农业学报,2015,(01):192.[doi:10.3969/j.issn.1000-4440.2015.01.030]
　YANG Wei-qun,GUAN Yue-qing.Preparation， purification and characterization of polyclonal antibody against chloramphenicol[J].,2015,(04):192.[doi:10.3969/j.issn.1000-4440.2015.01.030]
[6]余璐璐,龚绒雪,吕林涛,等.拟南芥氰丙氨酸合酶CYS-C1基因扩增及多克隆抗体制备[J].江苏农业学报,2017,(06):1235.[doi:doi:10.3969/j.issn.1000-4440.2017.06.006]
　YU Lu-lu,GONG Rong-xue,LYU Lin-tao,et al.Cyanoalanine synthase CYS-C1 gene amplification and polyclonal antibody preparation in Arabidopsis thaliana[J].,2017,(04):1235.[doi:doi:10.3969/j.issn.1000-4440.2017.06.006]
[7]孙静,陈明,孟家松,等.一个凤丹PoFAD2基因家族新成员PoFAD2-2的克隆及表达模式分析[J].江苏农业学报,2018,(06):1339.[doi:doi:10.3969/j.issn.1000-4440.2018.06.020]
　SUN Jing,CHEN Ming,MENG Jia-song,et al.Cloning and bioinformatics analysis of a new PoFAD2 family member PoFAD2-2 from Paeonia ostii T. Hong & J. X. Zhang[J].,2018,(04):1339.[doi:doi:10.3969/j.issn.1000-4440.2018.06.020]
[8]余艳玲,冯鹏霏,潘传燕,等.尼罗罗非鱼TGF-β1蛋白原核表达及多克隆抗体的制备[J].江苏农业学报,2019,(06):1407.[doi:doi:10.3969/j.issn.1000-4440.2019.06.020]
　YU Yan-ling,FENG Peng-fei,PAN Chuan-yan,et al.Prokaryotic expression and polyclonal antibodies preparation of TGF-β1 protein in Nile tilapia[J].,2019,(04):1407.[doi:doi:10.3969/j.issn.1000-4440.2019.06.020]
[9]邢雪,王元红,李传峰,等.羊口疮病毒F1L融合Fe蛋白的表达与鉴定[J].江苏农业学报,2020,(01):130.[doi:doi:10.3969/j.issn.1000-4440.2020.01.018]
　XING Xue,WANG Yuan-hong,LI Chuan-feng,et al.Expression and identification of orf virus F1L fused with Fe protein[J].,2020,(04):130.[doi:doi:10.3969/j.issn.1000-4440.2020.01.018]
[10]吕炫,张淼,胡增金,等.鹅星状病毒衣壳纤突蛋白VP27多克隆抗体的制备和鉴定[J].江苏农业学报,2021,(02):412.[doi:doi:10.3969/j.issn.1000-4440.2021.02.018]
　LYU Xuan,ZHANG Miao,HU Zeng-jin,et al.Preparation and identification of polyclonal antibody against the capsid spike protein VP27 of goose astrovirus[J].,2021,(04):412.[doi:doi:10.3969/j.issn.1000-4440.2021.02.018]

备注/Memo

备注/Memo:
收稿日期：2020-01-05基金项目：国家转基因生物新品种培育科技重大专项(2018ZX08011-01B）；湖南省重点领域研发计划项目(2019DK2011）作者简介：熊丹(1982-），女，湖南长沙人，硕士研究生，主要从事植物生物化学与分子生物学研究。(Tel）13786122442；(E-mail）17618159@qq.com。周霆为共同第一作者。通讯作者：汪启明，(E-mail）wqmqmx21@126.com。陈松，(Tel）13913969008；(E-mail）chengsong1963@126.com
更新日期/Last Update: 2020-09-08