[1]王怡雯,齐颖颖,张红星,等.福氏志贺氏菌2a单克隆抗体的制备及ELISA方法的建立[J].江苏农业学报,2017,(02):450-455.[doi:doi:10.3969/j.issn.1000-4440.2017.02.033]
　WANG Yi-wen,QI Ying-ying,ZHANG Hong-xing,et al.Preparation of Shigella flexneri 2a monoclonal antibodies and establishment of ELISA for its detection[J].,2017,(02):450-455.[doi:doi:10.3969/j.issn.1000-4440.2017.02.033]
点击复制

福氏志贺氏菌2a单克隆抗体的制备及ELISA方法的建立()
分享到：

江苏农业学报[ISSN:1006-6977/CN:61-1281/TN]

卷:
期数:
2017年02期
页码:
450-455
栏目:
加工贮藏·质量安全
出版日期:
2017-04-30

文章信息/Info

Title:
Preparation of Shigella flexneri 2a monoclonal antibodies and establishment of ELISA for its detection
作者:
王怡雯; 齐颖颖; 张红星; 张帅; 谢远红; 刘慧
（食品质量与安全北京实验室/农产品有害微生物及农残安全检测与控制北京市重点实验室/北京市食品安全免疫快速检测工程技术研究中心/微生态制剂关键技术开发北京市工程实验室/北京农学院食品科学与工程学院,北京102206）
Author(s):
WANG Yi-wen; QI Ying-ying; ZHANG Hong-xing; ZHANG Shuai; XIE Yuan-hong; LIU Hui
(Beijing Laboratory of Food Quality and Safety/Beijing Key Laboratory of Agricultural Product Detection and Control for Spoilage Organisms and Pesticide/Beijing Engineering Technology Research Center of Food Safety Immune Rapid Detection/Beijing Engineering Laboratory of Key Technology Development of Microecologics/College of Food Science and Engineering，Beijing University of Agriculture，Beijing 102206， China)
关键词:
福氏志贺氏菌2a; 单克隆抗体; 杂交瘤; 双抗夹心ELISA
Keywords:
Shigella flexneri 2a; monoclonal antibody; hybridoma; sandwich ELISA
分类号:
R378.2+5
DOI:
doi:10.3969/j.issn.1000-4440.2017.02.033
文献标志码:
A
摘要:
为制备特异性和灵敏度较高的抗福氏志贺氏菌2a单克隆抗体，并建立双抗夹心酶联免疫吸附检测法，用于检测生鲜食品中的福氏志贺氏菌2a。本研究利用自制的福氏志贺氏菌2a抗原免疫BALB/c小鼠，并用杂交瘤技术进行细胞融合，经筛选克隆后，获得3株分泌抗福氏志贺氏菌2a单克隆抗体稳定的杂交瘤细胞，分别命名为5C12、1B5和6A11。3株杂交瘤细胞注射进小鼠腹腔后，诱导产生的腹水中抗体的效价为 1∶2.048×105～1∶1.024×105，免疫球蛋白亚型均为IgG。3株抗体识别抗原表位的最佳配对为5C12和6A11，由此建立双抗夹心ELISA体系，测得其灵敏度为1 000 CFU/g，且具有良好的特异性。
Abstract:
Preparation of specific and highly sensitive Shigella flexneri 2a monoclonal antibodies. The enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) was developed for the detection of Shigella flexneri 2a in food. In this study, BALB/c mice were immunized with Shigella flexneri 2a antigen. Hybridization techniques were used for cell fusion. After screening and cloning, three hybridoma cells lines, 5C12, 1B5 and 6A11, were obtained secreting monoclonal antibodies against S. flexneri 2a stably. Three hybridoma cells were named. The hybridoma cells was injected into the abdominal cavity of mice, and the induced antibodies titers were 1∶1.024×105、1∶1.024×105 and 1∶2.048×105. Their immune globulin subtypes were IgG. The best pairing of three antibodies was 5C12 and 6A11. The sandwich ELISA system established afterwards was good in sensitivity and specificity.

参考文献/References:

［1］林晓丽，赖卫华，张莉莉，等.志贺氏菌检测方法的最新研究进展[J].食品科学，2009，30(15)：271-275.
［2］WARREN B R，PARISH M E，SCHNEIDER K R.Shigella as a food borne pathogen and current methods for detection in food［J］.Critical Reviews in Food Science and Nutrition，2006，46(7)：551-567．
［3］KOTLOFF K，WINICKOFF J，IVANOFF B，et al.Global burden of Shigella infections:implications for vaccine development and implementation of control strategies[J].Bulletin of the World Health Organization，1999，77(8)：651-666.
［4］张帅，齐颖颖，张红星，等.快速检测生鲜肉中的三种食源性致病菌［J］.江苏农业学报，2016，32(4)：939-945.
［5］陈伟，李正国，杨平，等.肉制品中志贺氏菌DNA 的快速提取方法［J］.食品发酵工业，2009，35(5)：257-261．
［6］TALUKDER K A， ISIAM M A， DUTTA D K. Phenotypic and genotypic chara-cterization of serologically atypical strains of shgellaflexneri type 4 isolated in Dhaka Bangladesh[J].Journal Clinic Microbiol，2002，40(7):2490-2497.
［7］张纪中.微生物分类学[M].上海：复旦大学出版社，1990：27.
［8］黄宝华，陈庆森，庞广昌.志贺氏菌研究及其快速检测技术发展现状[J].食品科学，2004，25(11):333-336.
［9］齐颖颖，吴萌，王怡雯，等.单增李斯特菌单克隆抗体的研制及特性分析[J].食品与生物技术学报，2016，35(2)：151-155.
［10］秦巧玲. 志贺氏菌多克隆抗体制备及ELISA检测方法的建立[D].武汉:华中农业大学，2008.
［11］张帅，齐颖颖，张红星，等.双抗夹心酶联免疫吸附快速检测冷鲜肉中的6种血清型沙门氏菌[J].食品科学，2016，37(16)：211-215.
［12］HOWARDOWARD G C， KASER M R.抗体制备与使用实验指南[M].张权庚，张玉祥，丁卫，等，译.北京：科学出版社，2010：97.
［13］徐迪.志贺氏菌多克隆、单克隆及基因工程抗体的制备与免疫层析试纸条的初步研制[D].南昌：南昌大学，2013.
［14］祭芳，曹摇欢，徐剑宏，等.抗玉米赤霉烯酮单克隆抗体的制备[J].江苏农业学报，2014，30(2)：417-422.
［15］VAN ZIJDERVELD F G， VAN A M， ANAKOTTA J. Comparison of four different Enzyme Linked Immunosorbentassys for serological diagnosis of Salmonella enteritidis infections in experimentally infected chickens[J].Journal of Clinical Microbiology，1992，30(10)：2560-2566.
［16］刘苏燕，董邦全，李恩善.分析不同单克隆抗体识别的表位特异性的三种ELISA方法比较[J].上海免疫学杂志，1991，11(2)：108-109,112.
［17］CUTTER，CATHERINE N，SIRAGUSA G R. Eificacy of organic acids against Escherichia coli O157∶H7 attached to beef carcass tissue using a bilot scale model carass washer[J].Jonrnal of Food Protection，1994，57(2)：97-103.
［18］柳忠辉，吴雄文.医学免疫学实验技术[M].北京：人民卫生出版社，2014：18-19.
［19］CARLIN N I, LINDBERG A A. Monoclonal antibodies specific for O-antigenic polysaccharides of Shigellaflexneri: clones binding to II, II:3,4, and 7,8 epitopes[J]. Journal of Clinical Microbiology, 1983, 18(5):1183.
［20］徐锋，武晓丽，徐迪，等.牛奶样品中志贺氏菌胶体金免疫试纸条检测方法的建立[J].中国乳品工业，2012,40(5)：46-50.
［21］葛萃萃，钟青萍.抗志贺氏菌IgY的提纯及建立间接ELISA检测志贺氏菌[J].中国食品学报，2006，6(1)：11-14. ［1］林晓丽，赖卫华，张莉莉，等.志贺氏菌检测方法的最新研究进展[J].食品科学，2009，30(15)：271-275.
［2］WARREN B R，PARISH M E，SCHNEIDER K R.Shigella as a food borne pathogen and current methods for detection in food［J］.Critical Reviews in Food Science and Nutrition，2006，46(7)：551-567．
［3］KOTLOFF K，WINICKOFF J，IVANOFF B，et al.Global burden of Shigella infections:implications for vaccine development and implementation of control strategies[J].Bulletin of the World Health Organization，1999，77(8)：651-666.
［4］张帅，齐颖颖，张红星，等.快速检测生鲜肉中的三种食源性致病菌［J］.江苏农业学报，2016，32(4)：939-945.
［5］陈伟，李正国，杨平，等.肉制品中志贺氏菌DNA 的快速提取方法［J］.食品发酵工业，2009，35(5)：257-261．
［6］TALUKDER K A， ISIAM M A， DUTTA D K. Phenotypic and genotypic chara-cterization of serologically atypical strains of shgellaflexneri type 4 isolated in Dhaka Bangladesh[J].Journal Clinic Microbiol，2002，40(7):2490-2497.
［7］张纪中.微生物分类学[M].上海：复旦大学出版社，1990：27.
［8］黄宝华，陈庆森，庞广昌.志贺氏菌研究及其快速检测技术发展现状[J].食品科学，2004，25(11):333-336.
［9］齐颖颖，吴萌，王怡雯，等.单增李斯特菌单克隆抗体的研制及特性分析[J].食品与生物技术学报，2016，35(2)：151-155.
［10］秦巧玲. 志贺氏菌多克隆抗体制备及ELISA检测方法的建立[D].武汉:华中农业大学，2008.
［11］张帅，齐颖颖，张红星，等.双抗夹心酶联免疫吸附快速检测冷鲜肉中的6种血清型沙门氏菌[J].食品科学，2016，37(16)：211-215.
［12］HOWARDOWARD G C， KASER M R.抗体制备与使用实验指南[M].张权庚，张玉祥，丁卫，等，译.北京：科学出版社，2010：97.
［13］徐迪.志贺氏菌多克隆、单克隆及基因工程抗体的制备与免疫层析试纸条的初步研制[D].南昌：南昌大学，2013.
［14］祭芳，曹摇欢，徐剑宏，等.抗玉米赤霉烯酮单克隆抗体的制备[J].江苏农业学报，2014，30(2)：417-422.
［15］VAN ZIJDERVELD F G， VAN A M， ANAKOTTA J. Comparison of four different Enzyme Linked Immunosorbentassys for serological diagnosis of Salmonella enteritidis infections in experimentally infected chickens[J].Journal of Clinical Microbiology，1992，30(10)：2560-2566.
［16］刘苏燕，董邦全，李恩善.分析不同单克隆抗体识别的表位特异性的三种ELISA方法比较[J].上海免疫学杂志，1991，11(2)：108-109,112.
［17］CUTTER，CATHERINE N，SIRAGUSA G R. Eificacy of organic acids against Escherichia coli O157∶H7 attached to beef carcass tissue using a bilot scale model carass washer[J].Jonrnal of Food Protection，1994，57(2)：97-103.
［18］柳忠辉，吴雄文.医学免疫学实验技术[M].北京：人民卫生出版社，2014：18-19.
［19］CARLIN N I, LINDBERG A A. Monoclonal antibodies specific for O-antigenic polysaccharides of Shigellaflexneri: clones binding to II, II:3,4, and 7,8 epitopes[J]. Journal of Clinical Microbiology, 1983, 18(5):1183.
［20］徐锋，武晓丽，徐迪，等.牛奶样品中志贺氏菌胶体金免疫试纸条检测方法的建立[J].中国乳品工业，2012,40(5)：46-50.
［21］葛萃萃，钟青萍.抗志贺氏菌IgY的提纯及建立间接ELISA检测志贺氏菌[J].中国食品学报，2006，6(1)：11-14.

相似文献/References:

[1]张帅,齐颖颖,张红星,等.快速检测生鲜肉中三种食源性致病菌[J].江苏农业学报,2016,(04):939.[doi:10.3969/j.issn.100-4440.2016.04.036]
　ZHANG Shuai,QI Ying-ying,ZHANG Hong-xing,et al.Rapid detection of three foodborne pathogens in raw meat[J].,2016,(02):939.[doi:10.3969/j.issn.100-4440.2016.04.036]
[2]李盼,张晓帅,邱雨楼,等.有机磷农药广谱特异性单克隆抗体的制备及特性分析[J].江苏农业学报,2017,(06):1415.[doi:doi:10.3969/j.issn.1000-4440.2017.06.031]
　LI Pan,ZHANG Xiao-shuai,QIU Yu-lou,et al.Production and characterization of broad-specific monoclonal antibody for organophosphorus pesticides recognization[J].,2017,(02):1415.[doi:doi:10.3969/j.issn.1000-4440.2017.06.031]
[3]何方洋,杨昌松,韩深,等.应用酶联免疫法测定环境水样中雌三醇的残留量[J].江苏农业学报,2017,(06):1422.[doi:doi:10.3969/j.issn.1000-4440.2017.06.032]
　HE Fang-yang,YANG Chang-song,HAN Shen,et al.Enzyme-linked immunosorbent assay（ELISA） for determination of estriol in environmental water sample[J].,2017,(02):1422.[doi:doi:10.3969/j.issn.1000-4440.2017.06.032]
[4]任春梅,杨柳,缪倩,等.小麦黄花叶病毒单克隆抗体的制备及ACP-ELISA检测方法的建立[J].江苏农业学报,2018,(01):34.[doi:doi:10.3969/j.issn.1000-4440.2018.01.005]
　REN Chun-mei,YANG Liu,MIAO Qian,et al.Production of monoclonal antibodies to wheat yellow mosaic virus and ACP-ELISA application in virus detection[J].,2018,(02):34.[doi:doi:10.3969/j.issn.1000-4440.2018.01.005]
[5]祁光宇,刘斌,赵兴绪.猪流行性腹泻病毒HB2015分离株N基因表达及单克隆抗体的制备[J].江苏农业学报,2018,(01):76.[doi:doi:10.3969/j.issn.1000-4440.2018.01.011]
　QI Guang-yu,LIU Bin,ZHAO Xing-xu.Expression of N gene of porcine epidemic diarrhea virus（PEDV） HB2015 strain and preparation of monoclonal antibodies against PEDV[J].,2018,(02):76.[doi:doi:10.3969/j.issn.1000-4440.2018.01.011]
[6]杨柳,任春梅,缪倩,等.黄瓜绿斑驳花叶病毒的双抗夹心ELISA检测[J].江苏农业学报,2018,(04):769.[doi:doi:10.3969/j.issn.1000-4440.2018.04.008]
　YANG Liu,REN Chun-mei,MIAO Qian,et al.DAS-ELISA detection against cucumber green mottle mosaic virus[J].,2018,(02):769.[doi:doi:10.3969/j.issn.1000-4440.2018.04.008]
[7]刘蓓蓓,韦艳娜,陈蓉,等.半固体培养法制备非洲猪瘟病毒pA104R蛋白的单克隆抗体[J].江苏农业学报,2024,(04):682.[doi:doi:10.3969/j.issn.1000-4440.2024.04.012]
　LIU Bei-bei,WEI Yan-na,CHEN Rong,et al.Preparation of monoclonal antibody against pA104R protein of African swine fever virus by semi-solid culture method[J].,2024,(02):682.[doi:doi:10.3969/j.issn.1000-4440.2024.04.012]

备注/Memo

备注/Memo:
收稿日期：2016-11-11 基金项目：北京市属高等学校高层次人才引进与培养长城学者计划项目（CIT&TCD20140315）；北京农学院协同创新建设项目 作者简介：王怡雯（1992-），女，北京大兴人，硕士研究生，主要从事食品安全快速检测研究。（E-mail）791096628@qq.com 通讯作者：张红星，（E-mail）hxzhang511@163.com
更新日期/Last Update: 2017-05-02