[1]王耘,武爱华,刘贤金,等.亲和短肽用于快速检测转基因蛋白Cry3Bb[J].江苏农业学报,2017,(03):690-694.[doi:doi:10.3969/j.issn.1000-4440.2017.03.030]
　WANG Yun,WU Ai-hua,LIU Xian-jin,et al.Quantitative detection of Cry3Bb protein in transgenic plants by phage-displayed peptide[J].,2017,(03):690-694.[doi:doi:10.3969/j.issn.1000-4440.2017.03.030]
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亲和短肽用于快速检测转基因蛋白Cry3Bb()
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江苏农业学报[ISSN:1006-6977/CN:61-1281/TN]

卷:
期数:
2017年03期
页码:
690-694
栏目:
加工贮藏·质量安全
出版日期:
2017-06-30

文章信息/Info

Title:
Quantitative detection of Cry3Bb protein in transgenic plants by phage-displayed peptide
作者:
王耘1; 武爱华2; 刘贤金2; 谢雅晶2; 闫娜1; 张存政2
（1.金陵科技学院园艺学院，江苏南京210038；2.江苏省农业科学院食品质量安全与检测研究所/农业部食品质量安全监控重点开放实验室，江苏南京210014）
Author(s):
WANG Yun1; WU Ai-hua2; LIU Xian-jin2; XIE Ya-jing2; YAN Na1; ZHANG Cun-zheng2
(1.College of Horticulture，Jinling Institute of Technology，Nanjing 210038，China;2.Institute of Food Quality Safety and Detection，Jiangsu Academy of Agricultural Sciences/Key Laboratory of Control Technology and Standard for Agro-product Safety and Quality，Ministry of Agriculture，Nanjing 210014， China)
关键词:
Cry3Bb毒素; 转基因植物; 噬菌体展示肽; 间接竞争ELISA
Keywords:
Cry3Bb toxin; transgenic plant; phage-displayed peptide; indirect competitive enzyme-linked immunosorbent assay （IC-ELISA）
分类号:
X836
DOI:
doi:10.3969/j.issn.1000-4440.2017.03.030
文献标志码:
A
摘要:
本研究利用竞争洗脱法淘选与Cry3Bb毒素具有亲和力的特异性短肽，以此建立间接竞争酶联免疫吸附检测方法(IC-ELISA)。经过4轮淘选、富集,获得与靶蛋白具有较高亲和力的B10克隆（ACIHSPTALCGGG）。所建立的检测方法稳定性较好，变异系数在5%以内；线性检测范围为 0.03～2995 μg/ml，线性回归方程为 (Y=20044x+50407，R2=0.983 4)，检测限为0.009 6 μg/ml，在玉米样品中提取回收率为 92.26%～10122%。本研究所建立的ELISA 检测方法为粮食中Cry3Bb蛋白的定量检测提供了有效的手段，在转基因产品的检验检疫中有较高的应用价值。
Abstract:
This study aimed to develop a quantitative indirect competitive enzyme-linked immunosorbent assay (IC-ELISA) for detection of Cry3Bb protein in corn. A Ph.D.-C7C phage display peptide library was used to screen peptides specifically binding Cry3Bb. An phage clone, B10(ACIHSPTALCGGG), showed higher affinity and specificity to Cry3Bb in vitro compared to other clones. The newly developed ELISA exhibited good stability with the coefficient of variation less than 5%. In the concentration range of 0.03-2995 μg/ml, the linear equation Y=20044x+50407，R2=0.983 4, was regressed with the detection limit of 0.009 6 μg/ml. The recoveries of Cry3Bb in corn extract ranged from 92.26% to 10122%. The established IC-ELISA provides an effective way to quantitatively detect Cry3Bb protein in corn.

参考文献/References:

[1]JAMES C. 2015 年全球生物技术/转基因作物商业化发展态势[J].中国生物工程杂志，2016，36(4)：1-11.
[2]SANVIDO O，ROMEIS J，GATHMANN A，et al.Evaluating environmental risks of genetically modified crops: ecological harm criteria for regulatory decision-making[J]. Environmental Science & Policy，2012，15(1)：82-91.
[3]DOMINGO J L，BORDONABA J G. A literature review on the safety assessment of genetically modified plants[J]. Environment International，2011，37(4)：734-742.
[4]LIU Y，LI J，LUO Z，et al. The fate of fusion Cry1Ab/1Ac proteins from Bt -transgenic rice in soil and water[J]. Ecotoxicology & Environmental Safety，2015，124：455-459.
[5]JIANG Y，LING L，ZHANG L，et al. Transgenic Bt，(Cry1Ab/Ac) rice lines with different genetic backgrounds exhibit superior field performance under pesticide-free environment[J]. Field Crops Research，2016，193：117-122.
[6]ZHU X L，CHEN L L，SHEN P，et al. High sensitive detection of Cry1Ab protein using a quantum dot-based fluorescence-linked immunosorbent assay [J]. Journal of Agricultural and Food Chemistry，2011，59(6)： 2184-2189.
[7]ALBRIGHT V C，HELLMICH R L，COATS J R. Enzyme-linked immunosorbent assay detection and bioactivity of Cry1Ab protein fragments[J]. Environmental Toxicology & Chemistry, 2016, 35(12)：3101-3112.
[8]邱宇，曹丽，郝晓宁,等. 肺癌T7噬菌体文库中MUC1蛋白抗原模拟表位的筛选[J].免疫学杂志，2016，32(2)：132-136.
[9]WEI Y，HUA X，LIU X，et al. Development of an enzyme-linked immunosorbent assay for thiacloprid in soil and agro-products with phage-displayed peptide[J]. Analytical Biochemistry，2015，481：27-32.
[10]徐重新，张存政，何鑫,等. 抗Cry1F毒素单链抗体的筛选及初步应用[J].江苏农业学报，2015，31(5)：1166- 1172.
[11]武爱华，张霄，刘媛,等. Cry2Aa毒素结合十二肽的筛选与鉴定[J]. 江苏农业学报，2015，31(4)：929-941.
[12]ZＵ＇IGA-NAVARRETE F，GMEZ I，PEA G，et al. Identification of Bacillus thuringiensis，Cry3Aa toxin domain II loop 1 as the binding site of Tenebrio molitor，cadherin repeat CR12[J]. Insect Biochemistry & Molecular Biology，2015，59：50-57.
[13]梁靓，李毅然. 转基因植物及其产品的应用价值和安全风险展望[J].食品安全质量检测学报，2015，6(11)：4373-4377.
[14]丁照鑫，王涵祎，曹利娟，等. 苏云金芽孢杆菌Vip3Aa10毒素结合肽的筛选及活性测定[J].中国农业科学，2015，48(18)：3627-3634.
[15]胡义，林山，李珣，等. CCR9亲和短肽的筛选及其结合活性的鉴定[J].免疫学杂志，2016，32(1)：69-72.
[16]邓省亮，李平，贺伟华，等. 小分子免疫分析技术及其研究进展[J].食品科学，2016，37(11)：277-282.
[17]于志晶，蔡勤安，林秀峰，等. 转基因抗虫水稻中BT蛋白表达量的研究[J].安徽农业科学，2012，40(6)：3251- 3252.

备注/Memo

备注/Memo:
收稿日期：2016-09-28 基金项目：江苏省自然科学基金青年基金项目（BK20150114）；江苏省高校自然科学研究项目（14KJB 210004）；金陵科技学院博士启动项目（jit-6-201518）；金陵科技学院校级科研基金孵化项目（C140501） 作者简介：王耘（1985-），女，江苏南京人，博士，讲师，主要从事农产品安全检测与质量控制。（E-mail）wangyun@jit.edu.cn
更新日期/Last Update: 2017-06-29